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  • WB 增強型ECL發光液

    產品貨號: IN0004

    產品規格: 100ml/500ml

    產品品牌:Invigentech

    產品價格:833/3333



產品概述:

1.包裝規格                             

規格:100ml 、500ml

2.儲存條件

4℃避光保存1年;如果長期不用,可-20℃避光保存;可在4℃或室溫運輸。

  1. 產品描述:  

    本試劑以化學發光方法檢測蛋白質或核酸類生物大分子。蛋白質或核酸類生物大分子在電泳后轉移到印跡膜上,分別用一抗和辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)標記的二抗順序結合膜上的目的蛋白;或以HRP標記的探針直接或間接結合膜上的目的核酸。洗膜后用新鮮配制的ECL工作液,在室溫下避光孵育膜2-3 min,將印跡膜用保鮮膜包被粘貼固定于X光片曝光暗盒,然后轉入暗室將X光膠片壓在膜上曝光時長可為數秒到數小時。顯影定影后蛋白質或核酸條帶可清晰顯示在X光膠片上,也可不進行X光膠片曝光顯影步驟, 直接對印跡膜進行CCD掃描。

    試劑組分

組 分

IN0004、IN0005 (2×50 ml )

IN0004、IN0005  (2×250 ml )

ECL Substrate A

50 ml

250 ml

Peroxide Solution B

50 ml

250 ml

 

  1. 操作說明

    1.使用合適的方法進行Western Blot實驗,直至用PBSTTBS/TBST洗滌二抗。

    2.新鮮配制ECL工作液:ECL Substrate A液和Peroxide Solution B液按1:1混合后即為ECL工作液。工作液混合后請盡快使用,室溫放置數小時后仍可使用但靈敏度略有降低。

    3.用平頭鑷取出印跡膜,搭在濾紙上瀝干洗膜液但勿使膜完全干燥。用ECL工作液均勻滴加至印跡膜上,確保完全均勻覆蓋,室溫孵育2-3 min。ECL工作液使用量大約為0.125 ml/cm2膜或根據個人實驗習慣使用。

    4.用平頭鑷夾住印跡膜,棄發光工作液,用吸水紙略吸去多余工作液。

    5.快速將印跡膜置于二層保鮮膜之間,盡量趕盡氣泡。

    6.將印跡膜蛋白面朝上,放于X光膠片暗盒內,用透明膠帶粘貼邊緣固定。

    7.在暗室內放入X光片,根據顯色情況曝光適當時間,顯影定影。

    8.根據信號的強弱適當調整曝光及顯影時間,也可選擇不同時間多次曝光,以達更佳效果。

  2. 注意事項

    1.ECL工作液配制過程中吸取ECL Substrate A 液和Peroxide Solution B液時務必更換吸頭,工作液新鮮配制后應立即使用,室溫放置數小時后仍可使用但靈敏度略有降低。

    2.Peroxide Solution B液含有氧化劑,易被還原而失效。各溶液使用后,請蓋緊瓶蓋,以防失效。

    3.ECL發光液是HRP的顯色底物,因此檢測系統最終必須基于HRP酶標記抗體或者核酸探針。

    4.盡量避免將多張膜置于同一個洗膜盒內洗膜,相互吸附或摩擦可能造成背景增加。

    5.應使用高質量保鮮膜。質量較差的保鮮膜可能會淬滅熒光或由于含有雜質而污染印跡膜造成曝光背景值偏高。

    6.根據目的蛋白豐度不同,曝光時間可能是數秒至數小時。曝光時間不足會導致目的條帶不明確,曝光時間過長會使背景加深。

    7.疊氮化鈉(NaN3)能抑制HRP活性,若回收HRP標記探針或者抗體應避免使用NaN3,如必需使用勿超過0.01%。

    8.由于發光液極其靈敏,推薦大多數進口抗體起始濃度為一抗1:1000-1:4000,二抗1:2000-1:5000??贵w濃度過高可能造成高背景或沒有條帶。

    9.ECL Substrate A液和Peroxide Solution B液均對人體有害,操作時請小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內,為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作

    只能用于科學研究使用,禁止用于人、動物或者其它用途。


說明書:


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引用及參考文獻:


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